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第423章 成功（第3页）

最常用的报告基因大多是编码抗生素抗性蛋白的基因，通过检查产物是否具有抗生素的抗性来确定基因的表达情况。

氯霉素乙酰基转移酶（cat）:该报告基因来源于大肠杆菌转位子9，是第1个用于检测细胞内转录活性的报告基因。

氯霉素乙酰基转移酶可催化乙酰coa的乙酰基转移到氯霉素3羟基，而使氯霉素解毒。

cat在哺乳细胞无内源性表达，性质稳定，半衰期较短，适于瞬时表达研究。

可用同位素、荧光素和酶联免疫吸附测定检测其活性。

也可进行蛋白质印迹）和免疫组织化学分析。

cat与其他报告基因相比，线性范围较窄，灵敏性较低。

β半乳糖苷酶:β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacz基因编码。

可催化半乳糖苷水解。

最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达，是最常用的监测转染率的报道基因之一。

以邻-硝基苯-β-d-半乳吡喃糖苷（onpg）为底物可用标准的比色法检测酶活性，其检测动力学范围为6个数量级。

氯酚红-β-d-半乳吡喃糖苷（cprg）是另一个可用比色法检测酶活性的底物，其灵敏度比onpg高近10倍。

以mug和荧光素二半乳糖苷（fdg）为底物则可用荧光法检测其活性。

此法可检测单个细胞的酶活性，并可用于流式细胞学（facs）分析。

如以二氧杂环丁烷为底物，可用化学发光法检测酶活性，其检测动力学范围最大，灵敏度最高，与用生物发光法检测荧光素酶活性的灵敏度相似。

荧光素酶是能够催化不同底物氧化发光的一类酶。

哺乳细胞无内源性荧光素酶。

最常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和renilla荧光素酶。

细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。

萤火虫荧光素酶灵敏度高。

检测线性范围宽达7~8个数量级，是最常用于哺乳细胞的报道基因。

用荧光比色计即可检测酶活性，因而适用于高通量筛选。

随着具有膜通透性和光裂解作用的萤火虫荧光素酶的应用，无需裂解细胞即可检测酶活性。

renilla荧光素酶催化肠腔素氧化，产物可透过生物膜，可能是最适用于活细胞的报告分子。

将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中，可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。

自1986年起，萤火虫荧光素酶基因被用作测定基因表达的报告基因，获得了广泛的应用ga公司的pgl3及pgl2系列载体，含sv40启动子及增强子的不同组合，有助于分析dna片段的转录活性。

“主人，成功了！”

不知道过了多久，墨莲人恭敬地对李安道。

李安满意地看着自己的身体，然后进入了这个躯体之中！

（未完待续）。